产品目录

本产品是一种非常经典的细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒，被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。具有本底低，灵敏度高，线性范围宽、使用方便等特点。

本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。

MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan(图1A)。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解(图1B)。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度(图2)。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

图1．MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒实测效果图。A.HeLa细胞加入使用本试剂盒配制的MTT溶液，在细胞培养箱内孵育4小时，显微镜下可见大量结晶状的深紫色产物formazan生成。B.不同数量HeLa细胞在MTT溶液(MTT solution)加入后4小时的效果图(上图)及深紫色产物formazan生成后加入Formazan溶解液(Formazan solvent)，充分溶解后的效果图(下图)。

图2．本试剂盒检测不同数量HeLa细胞的效果图。不同的检测条件下，实际读数会因标准品的配制、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

组分	500次	2500次
MTT	25mg	125mg
MTT溶剂	5mL	25mL
Formazan溶解液	55mL	250mL

保存：4℃，有效期一年。MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室温保存。

• 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
  
• MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
  
• MTT配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
  
• Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以室温或37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
  
• 加入Formazan溶解液后请适当轻轻混匀，但须注意避免产生泡沫。

• MTT溶液的配制：用5mL MTT溶剂溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根据需要适当分装后-20℃避光保存。
  
• 通常细胞增殖实验每孔加入100μL 2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μL 5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要，进行培养并给予0～10μL特定的药物刺激。
  
• 每孔加入10μL MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育4小时。
  
• 每孔加入100μL Formazan溶解液，适当混匀，在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察发现formazan全部溶解。通常37℃孵育3～4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长一些，此时为加速溶解可以适当振摇数次。
  
• 在570nm测定吸光度(可参考图2)。如无570nm滤光片，可以使用560～600nm的滤光片。

相关搜索：细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT法)，细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒，细胞增殖及毒性检测试剂盒，细胞增殖与毒性检测试剂盒，MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit